慢病毒感染細(xì)胞|為什么你的感染效率那么差?

慢病毒不但可感染分裂或非分裂細(xì)胞，還可將外源基因有效地整合到宿主染色體上，從而實(shí)現(xiàn)持久表達(dá)，

又不易引發(fā)機(jī)體免疫反應(yīng)，被譽(yù)為細(xì)胞實(shí)驗(yàn)佳選的工具病毒。

并且慢病毒作為基因治療載體在各類(lèi)遺傳性和后天性的人類(lèi)疾病的治療中倍受歡迎：從基礎(chǔ)研究到臨床應(yīng)用，高純度、高滴度的慢病毒都是基因操作的理想工具。

由于實(shí)驗(yàn)中使用的細(xì)胞類(lèi)型不同，慢病毒感染的效率也會(huì)有差異；要想提高慢病毒的感染效率，合適的實(shí)驗(yàn)步驟和最佳的實(shí)驗(yàn)條件是成功的關(guān)鍵！

以“24孔培養(yǎng)板、貼壁細(xì)胞"為例，慢病毒感染細(xì)胞的常規(guī)操作步驟是這樣的：

Day 0

接種細(xì)胞：

每孔按5×個(gè)待感染細(xì)胞鋪板，用含有 10% FBS的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng);

Day 1

細(xì)胞感染：

感染前，根據(jù)說(shuō)明書(shū)用培養(yǎng)基配置感染液，備用吸掉舊培養(yǎng)基，更換為感染液; 并參考細(xì)胞 MOI值，計(jì)算病毒使用量，加入病毒進(jìn)行感染，混勻;

Day 2

病毒感染8-16h后，換回常規(guī)培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng);

Day 3-4

確認(rèn)感染效果：

感染72h后，顯微鏡下觀察感染效果，如EGFP、Cherry的表達(dá)情況；

如果你以為所有的細(xì)胞操作都這么簡(jiǎn)單的話，那真的是too young too simple！

那么在慢病毒感染細(xì)胞過(guò)程中，到底會(huì)遇到哪些問(wèn)題呢？

在細(xì)胞感染時(shí)， MOI是一個(gè)非常重要的指標(biāo)，如何確定MOI值呢？

MOI:復(fù)感染指數(shù)，是指病毒對(duì)細(xì)胞的感染能力，MOI越高，細(xì)胞越難被感染。通常把某株細(xì)胞有80%被感染時(shí)所用的病毒顆粒數(shù)和細(xì)胞數(shù)目

的比值作為該株細(xì)胞的MOI。

MOI=（病毒滴度×病毒體積）/細(xì)胞數(shù)目

感染條件及MOI的選擇原則：

1. 在細(xì)胞形態(tài)不受影響的情況下盡可能用少的病毒感染細(xì)胞

2. 選擇感染效率80%左右的作為最佳感染條件

通過(guò)細(xì)胞感染預(yù)實(shí)驗(yàn)可以知道慢病毒對(duì)細(xì)胞的最佳感染條件，來(lái)確定細(xì)胞的MOI，進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。